Печень – это наиболее важное место метаболизма лекарственных препаратов в организме. Экспериментальный метод по изучению микросомальной стабильности является первостепенным тестом панели АДМЕ. Микросомы печени – субклеточная фракция


Чтобы посмотреть этот PDF файл с форматированием и разметкой, скачайте файл и откройте на своем компьютере.
ТЕСТ НА ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ В МИКРОСОМАХ ПЕЧЕНИ Для разработки лекарственных веществ решающее значение имеет исследование метаболизма препарата. Печень – это наиболее важное место метаболизма лекарственных препаратов в организме. Экспериментальный мет од по изучению микросомальной стабильности является первостепенным тестом панели АДМЕ. Микросомы печени – субклеточная фракция, содержащая основные метаболические ферменты, такие как цитохромы Р450, монооксигеназы, трансферазы. Доступность микросом, получа емых из печени различных видов млекопитающих, делает их одним из широко используемых средств для оценки метаболизма новых химических соединений: предсказание клиренса, возможных метаболитов, идентификация цитохромов, отвечающих за метаболизм исследуемого п репарата. Использование пулированных микросом, полученных от нескольких доноров, позволяет исключить индивидуальную вариабельность. Свойства микросом хорошо охарактеризованы с использованием эталонных субстратов и воспроизводятся в разных партиях. Данный протокол описывает процедуру изучения метаболизма веществ в микросомальной фракции печени (крыс, мышей, собак, обезьян, человека) в присутствии кофактора I фазы метаболизма (НАДФН) или (по требованию) с добавлением кофактора II фазы – конъюгации (УДФГК) К раткое описание метода 0.5 мкM тест - препаратов инкубируют с микросомальной фракцией печени на шейкере при 37˚C в присутствии кофакторов. Реакции останавливают во временные точки 0, 5, 10, 15, 30 мин путем добавления ацетонитрила. После преципитации белко в, определяют количество оставшихся тест - препаратов в супернатантах с помощью ВЭЖХ - МС/МС. Инкубацию проводят в двух повторах. По кинетике убыли тестируемого вещества в процессе инкубации рассчитывают время полураспада (T1/2), клиренс in vitro (CLint) и ост авшееся количество вещества (% от начального). Контрольные вещества – верапамил и декстрометорфан, 7 - гидроксикумарин для II фазы метаболизма Протокол теста на определение стабильности в микросомах печени Вид микросом Человек, крыс ы , собак и , мыш и , приматы ( по требованию ) Концентрация микросом Кофактор 0.25 мг/мл НАДФН ( I ) или НАДФН+ УДФГК ( II ) Концентрация соединения Число повторов 0.5 мкМ ( по требованию ) 2 Концентрация ДМСО 0. 01 % Временные точки 0; 5; 1 0 ; 15 ; 3 0 мин Метод анализа ВЭЖХ - МС/МС Контроли - верапа м ил и декстрометорфан ( I ) - 7 - гидроксикумарин ( II ) - Стабильность без кофакторов Анализируемые параметры - t1/2, мин, время полураспада - CLint, мл/мин/кг, клиренс - оставшееся количество тестируемого соединения, % Число соединений на один вид микросом 10 + 2 контроля Подробнее: http://chemrar.ru/services/adme.php По вопросам заказа и проведения исследований: Ирина Титкова Биоаналитическая лаборатория ЗАО «ИИХР», ЦВТ "ХимРар" тел. р аб.: +7 (495) 925 - 30 - 74 +доб.(5 5 7 ) E - mail: [email protected]

Приложенные файлы

  • pdf 43040389
    Размер файла: 305 kB Загрузок: 0

Добавить комментарий